Geoselect : Биология : Реферат: Биологическая роль, структура и выделение митохондрий из печени крыс. (Биология)


	Биология / Реферат: Биологическая роль, структура и выделение митохондрий из печени крыс. (Биология)


	Космонавтика Уфология Авиация Административное право Арбитражный процесс Архитектура Астрология Астрономия Аудит Банковское дело Безопасность жизнедеятельности Биология Биржевое дело Ботаника Бухгалтерский учет Валютные отношения Ветеринария Военная кафедра География Геодезия Геология Геополитика Государство и право Гражданское право и процесс Делопроизводство Деньги и кредит Естествознание Журналистика Зоология Инвестиции Иностранные языки Информатика Искусство и культура Исторические личности История Кибернетика Коммуникации и связь Компьютеры Косметология Криминалистика Криминология Криптология Кулинария Культурология Литература Литература : зарубежная Литература : русская Логика Логистика Маркетинг Масс-медиа и реклама Математика Международное публичное право Международное частное право Международные отношения Менеджмент Металлургия Мифология Москвоведение Музыка Муниципальное право Налоги Начертательная геометрия Оккультизм Педагогика Полиграфия Политология Право Предпринимательство Программирование Психология Радиоэлектроника Религия Риторика Сельское хозяйство Социология Спорт Статистика Страхование Строительство Схемотехника Таможенная система Теория государства и права Теория организации Теплотехника Технология Товароведение Транспорт Трудовое право Туризм Уголовное право и процесс Управление Физика Физкультура Философия Финансы Фотография Химия Хозяйственное право Цифровые устройства Экологическое право


	Реферат: Биологическая роль, структура и выделение митохондрий из печени крыс. (Биология) Биологическая роль, структура и выделение митохондрий из печени крыс. Содержание 1. Введение 1. История вопроса 2. Перспективы исследований 1. Биологическая роль митохондрий 2. Ультраструктура митохондрий 1. Общие принципы организации 2. Особенности строения мембраны митохондрий 3. Описание общих принципов различных методов выделения митохондрий 1. Гомогенизация материала 1. Механическая 2. На основе кавитации газов 3. Ультразвук 2. Разделение субклеточных компонентов 1. Центрифугирование 2. Разделение в двухфазной системе, содержащей два полимера 3. Электрофорез 4. Ферменты - маркеры митохондрий 4. Методики 5. Заключение 6. Список литературы Введение История вопроса. Кёлликер одним из первых описал характерным образом ориентированные гранулы в саркоплазме поперечно-полосатой мышцы. Ему принадлежит так же честь первого выделения митохондрий из клеточных структур. В 1888 году он выделил эти гранулы из мышцы насекомых и показал, что они обладают мембраной и набухают в воде. Началом новой эры в цитологическом изучении митохондрий явилась работа Бенсли и Хэрра, которые предприняли попытку выделить митохондрий из взвеси разрушенных клеток печени, применив метод дифференциального центрифугирования. Из-за отсутствия подходящей среды для суспендирования и несовершенства метода центрифугирования Бенсли не удалось получить интактные митохондрий, но именно новаторская работа Бенсли определила слияние цитологических исследований митохондрий с исследованиями дыхания. Перспективы исследований. В настоящее время основная задача изучения митохондрий на молекулярном уровне сводится к выделению ферментативных компонентов окислительных циклов, определения их молекулярной структуры и механизма действия, анализу их участия в полиферментных системах в митохондриях и картированию их локализации на структурах митохондрий. То обстоятельство, что ферменты дыхательной цепи составляют более 25 % белка митохондриальных мембран заставляют рассматривать эти ферменты не только как функциональные, но и как структурные элементы митохондрии. Биологическая роль митохондрий. На протяжении ста с лишним лет, т. е. со времени первых работ Кёлликера (1850), наблюдавшего гранулы в саркоплазме поперечнополосатых мышц, велись кропотливые морфологические исследования, которые постепенно подготавливали почву для всестороннего изучения природы митохондрий. Но только в 1949 г. Кеннеди и Ленинджер установили, что в митохондриях протекает цикл окислительного фосфорилирования, т.е. что митохондрий служат местом генерирования энергии. С этого момента начинается новая эра в изучении митохондрий — эра, в которой блистательные открытия следуют одно за другим. В короткий срок были открыты осмотическая, сократительная, регуляторная и генетическая функции митохондрий и найдены многие из тех молекулярных структур, которые служат первичным субстратом 'этих функций. Было показано также, что митохондрий обеспечивают интеграцию многочисленных процессов клеточного обмена. Эти исследования еще не, завершены, но они могут служить примером плодотворности нового подхода к изучению живого, того подхода, который отличает молекулярную биологию. В развитии молекулярной биологии за последнее время наметился новый этап. До сих пор это были исследования главным образом, на уровне однородных молекул белков и нуклеиновых кислот, исследования, посвященные их структуре, функции и биосинтезу. Теперь же исследователь не довольствуется этим и переходит к изучению специфически организованных надмолекулярных комплексов, каковыми являются клеточные органеллы. Некоторые функции этих органелл также могут быть истолкованы на уровне индивидуальных молекул, например молекул отдельных ферментов. Но главная особенность клеточных органелл — это интеграция ферментативных процессов. Так, благодаря наличию в составе митохондрий различных белков, липидов, нуклеиновых кислот и углеводов, соединению их между собой и упорядоченному размещению в пространстве в виде трехслойных мембран эти образования приобретают свойства, которые исчезают при их расчленении на отдельные молекулы. Свойства эти: векторный характер действия митохондриальных ферментов (в отличие от скалярного, т. е. не зависящего от направления, действия растворимых ферментов), способность к непосредственному преобразованию энергии окисления в осмотическую и механическую энергию, способность к автономному синтезу белков и т. д. Каждое из этих свойств определяется не простой суммой реакций, катализируемых отдельными ферментами, а обусловлено взаимодействием точно ориентированных ферментных и неферментных макромолекул. Само собой разумеется, что глубокое исследование и познание природы клеточных органелл возможно лишь путем расчленения их на отдельные молекулы с последующей реконструкцией. Ультраструктура митохондрии Общие принципы организации. Внутренне пространство митохондрии окружено двумя непрерывными системами мембран, каждая из которых представляет собой замкнутый мешок; эти мешки расположены так, что всю митохондрию можно представить себе, как мешок внутри мешка. Просвет внутреннего мешка не сообщается с пространством между двумя мембранами. Наружная мембрана гладкая, а внутренняя образует многочисленные впячивания, которые в самом простом случае имеют форму перегородок, но могут принимать крайне сложные очертания. Палад назвал эти впячивания митохондриальными кристами. Другой характерный компонент структуры митохондрии - это матрикс, который заполняет просвет, окруженный внутренней мембраной. Известно, что он содержит много белка и некоторое количество липидов; по-видимому, он обладает определенной организацией и более или менее жесткой структурой. Наконец, митохондрии, фиксированные осмием часто содержат в матриксе ряд мелких гранул. Число, диаметр и плотность этих внутримитохондриальных гранул изменяются в зависимости от состояния обмена веществ в тканях. Особенности строения мембраны митохондрии. Так как наибольшее практическое значение представляют внутренние мембраны митохондрии, содержащие дыхательные ансамбли, имеет смысл более детально познакомиться с ультраструктурой митохондриальной мембраны. При детальном анализе было выявлено, что митохондриальные мембраны содержат 35 -40 % липидов, преимущественно фосфатидов, и 60 - 65 % белка. Небольшие различия, которые иногда наблюдаются обусловлены различными условиями получения при использовании различных физических и химических способов разрушения структуры митохондрии. Митохондрии печени крысы содержат значительные количества фосфатидилэтаноламина, фосфатидилхолина, инозитфосфатидов, кардиолипина и фосфатидилсерина; содержание плазмалогена и сфингомиелина невелико, иногда они вовсе отсутствуют. Характерное содержание и количественное содержание липидов в митохондриальной мембране, вероятно обусловлены необходимостью поддержания термодинамически устойчивого двойного слоя липидов, образующего остов мембраны, который служит опорой для дыхательных ансамблей. По- видимому, большое значение имеет тот факт, что практически все липиды митохондриальной мембраны экстрагируются смесью хлороформ - метанол. Это указывает на наличие лишь незначительного числа ковалентных связей между липидами и белковыми элементами или даже на полное их отсутствие; этот факт свидетельствует о высокой степени стабилизации липидов и белков мембранных структурах. Крейн показал, что цитохром с соединяется с фосфатидилэтаноламином, образуя устойчивый комплекс. Возможно, что именно такое взаимодействие липид - белок совместно с гидрофобными связями и обеспечивает такую стабилизацию мембранной структуры. Криддл и сотрудники выделили мономерную форму, которую они назвали структурным белком митохондриальной мембраны. При нейтральном рН структурный белок находится в полимерной форме и не растворим в воде. Мономерная форма имеет молекулярный вес около 22000, но тенденция к полимеризации нарушает точность седиментационных и электрофоретических исследований. Структурный белок способен соединяться с чистыми цитохромами а, Ь, и ее образованием растворимых в воде комплексов в молярном отношении 1:1, причем условия этого взаимодействия для каждого случая различны. Предполагается, что в таких комплексах образуются преимущественно гидрофобные связи. Далее, оказалось, что структурный белок соединяется с фосфолипидами. Таким образом, структурный белок способен к взаимодействию с двумя другими основными молекулярными элементами мембраны - с переносчиками электронов и с фосфолипидами. Склонность цитохромов, флавопротеидов и структурного белка к существованию в мономерной и полимерной формах указывает на выраженную тенденцию этих молекул к образованию очень устойчивых макромолекулярных ансамблей, имеющих пластинчатую структуру. Так как для будущих исследований наибольший интерес представляет цитохром с, то следует уделить особое внимание именно этому ферменту. Этот цитохром отличается от остальных тем, что он легко экстрагируется из митохондрий в растворимой форме с помощью кислот и нейтральных растворов солей. Молекулярный вес кристаллического фермента 12000, изоэлектрическая точка при высоком рН; в молекулу входит одна железопорфириновая группа, которая представлена производным протопорфирина и соединена (ковалентно) с двумя цистеиновыми остатками пептидной цепи, посредством двух тиоэфирных связей. При рН 7,0 атомы железа в положениях 5 и 6, очевидно, координированы с остатками гистидина; при нейтральных значениях рН цитохром с не имеет тенденции реагировать с кислородом. Известно, что третичная структура цитохрома с резко изменяется, как функция состояния окисления - восстановления. Цитохром с восстанавливается тиолами, аскорбатом, хинолами, и восстановленными цитохромами b и с1, а восстановленный цитохром с окисляется феррицианидом, некоторыми красителями и цитохромом а. Было показано, что в водных растворах цитохром с способен к полимеризации; удалось получить его димер и очистить так же тример и тетрамер. Вторичная и третичная структура цитохрома с изучается методом рентгеноструктурного анализа. Цитохром с легко соединяется с липидами, в частности с фосфатидилэтаноламином он образует комплекс, названный липоцитохромом с. Описание общих принципов различных методов выделения митохондрий. Митохондрии и после выделения сохраняют свой вид, не смотря на то, что мембраны их несколько повреждаются и контуры сглаживаются. В сущности, в наше время их выделяют тем же самым способом, которым пользовался еще Варбург. Прежде всего ткани гомогенизируют, используя для этого изотонический или гипертонический раствор сахарозы (сахароза способствует сохранности митохондрий, стабилизируя митохондриальную мембрану). Затем методом дифференциального центрифугирования отделяют ядра и неразрушенные клетки, а полученную надосадочную жидкость вновь центрифугируют при более высоких скоростях. Митохондрий оседают при этом на дно, образуя плотный буроватый осадок. Промыв этот осадок несколько раз можно получить довольно чистую митохондриальную фракцию. Таким путем очищенные фракции митохондрий были выделены из самых различных клеток животного и растительного происхождения и даже из некоторых простейших. В более ранних исследованиях митохондрий, как правило, получали из печени животных, так как её клетки очень легко разрушить, а так же потому, что она богата митохондриальной фракцией. После того, как было обнаружено, что бактериальная протеиназа разрушает клетку, не повреждая митохондрий, был разработан простой и быстрый метод получения мышечных митохондрий. Сахароза способствует сохранности митохондрий, стабилизируя митохондриальную мембрану. Гомогенизация материала. Методы гомогенизации: • Разрушение клеток (гомогенизатор Даунса 5-12 мл + плотно прилегающий пестик). Гипотонический шок + гомогенизатор. • Метод основанный на кавитации газов ( клеточная суспензия обогащенная газообразным азотом на 15-30 минут выдерживается при давлении до 65 атм., при быстром понижении давления до атмосферного, вследствие выделения азота происходит разрушение клеток. Органеллы остаются интактными). • Ультразвук. Состав среды в которой разрушают клетки определяется применяемым методом гомогенизации. Для разрушения тканей используют изоосмотический раствор сахарозы из расчета 100 мл на 10 г сырого веса ткани, при этом нестрашно если раствора сахарозы будет немного больше, особенно при центрифугировании в роторе с большим объемом. Гипотоническая среда способствует разрушению клеток, но, если обработка длится слишком долго, при этом может происходить разрушение клеточных органелл. Остальные параметры среды трудно обобщить и каждый мембранный препарат требует индивидуального подхода. Разделение субклеточных компонентов. • Центрифугирование. Основан на различиях по скорости седиментации (определяется весом, размером и формой частиц). Вещество, используемое для приготовления градиента должно быть легко растворимо в воде, физиологически безвредно и химически инертно; его раствор должен быть невязким, прозрачным в видимой и УФ-областях спектра, должен создавать низкое осмотическое давление. Обычно разделение субклеточных компонентов проводят в градиенте плотности сахарозы. Он удовлетворяет большинству указанных требований, но при высоких концентрациях он весьма вязок. Как правило разделение осуществляется за 3-4 часа или в течение ночи при 80.000 д или выше в роторе с подвесными стаканчиками. Обработка гомогената из печени крысы 10 мМ фосфатом калия увеличивает скорость седиментации митохондрий, не влияя на осаждение лизосом, что позволяет очищать последние в градиенте плотности перколла. • Разделение в двухфазной системе, содержащей два полимера. Полезным и быстрым способом выделения мембран является разделение их в водной двухфазной системе декстран - полиэтиленгликоль (ПЭГ), особенно если отсутствуют необходимые ультрацентрифуги и роторы. Метод, продуктивность которого может быть легко повышена, основан на использовании целого ряда свойств мембран, включая электрический заряд, плотность, массу и гидрофобность. Различие в этих свойствах обуславливает разное распределение компонентов смеси между верхней и нижней фазами и поверхностью раздела. По сродству к верхней фазе компоненты животной клетки располагаются в следующем порядке: эндоплазматический ретикулум / митохондрий / лизосомы / аппарат Гольджи / плазматические мембраны Успех в применении фазовых систем зависит от адекватности выбора их состава. Качество разделения зависит не только от конкретного полимера (пока число их ограничено - в основном используют декстран и ПЭГ), но и от других параметров: молекулярной массы полимера, концентрации солей, рН, химической модификации полимера. • Электрофорез. С помощью высоковольтного электрофореза в свободном потоке можно получить препараты субклеточных мембран и органелл высокой степени чистоты. Подлежащую разделению смесь компонентов подают тонкой струйкой в разделяющий буфер, который движется в электрическом поле; мембраны, несущие разный электрический заряд перемещаются в разделяющей ячейке со скоростью, определяемой их зарядом, при этом достигается 100 %-ное разрешение. Это мягкий способ выделения мембран с высоким препаративным выходом. Методику электрофореза в свободном потоке впервые применили для выделения лизосом и митохондрий из печени крысы. Таблица 1. Ферменты - маркеры митохондрий \|Фракция \| \|Маркерный фермент \| \|Митохондрии \|Внутренняя \|Сукцинатдегидрагеназа, Цитохромкидаза, \| \| \|мембрана \|Ротеном-нечувствительная NADH – цитохром с \| \| \| \|– редуктаза \| \|Митохондрии \|Наружная \|Моноаминооксидаза, Кинуренин-3-гидроксилаза\| \| \|мембрана \| \| В таблице 1 приведены ферментные маркеры, к которым относятся сравнительно стабильные ферменты, активность которых достаточно высока и ее удобно измерять. Обычно эти измерения проводят как можно быстрее после выделения; образец при этом хранят при 40С и не замораживают. Отмечено, что такой фермент, как цитохром с - редуктаза может оказаться лабильным и терять активность в замороженных препаратах мембран из печени. Для правильной оценки распределения фермента-маркера весьма существенным является пространственное расположение субстрат-связывающего сайта. Методики Субфракционирование мембран и компонентов матрикса митохондрий. Митохондрии выделяют из многочисленных источников стандартными методами. Субфракционирование их для получения внутренних и наружных мембран и компонентов матрикса проводят после замораживания - оттаивания препарата и / или обработки ультразвуком стандартного осадка митохондрий, суспендированных в среде, содержащей 1.2 М сахарозы и 2 мМ АТР (10 мг мембранного белка на 1 мл). При этом происходит разрушение митохондрий, а после центрифугирования в ступенчатом градиенте плотность сахарозы наружные мембраны концентрируются в полосе 0,45-1,12 М сахарозы, внутренние мембраны и компоненты матрикса собираются в осадке, под нижним слоем с концентрацией сахарозы 1,2 М, а промежуточная везикулярная фракция - между двумя предыдущими, в полосе 1,12-1,20М. Маркерами внутренних митохондриальных мембран служат ферменты - переносчики электронов. Наружная митохондриальная мембрана, которая при фрагментации образует везикулы, сходные по плотности и морфологии с везикулами из плазматической мембраны содержит моноаминооксидазу. Описан также метод выделения наружных митохондриальных мембран из печени крыс. Метод противоточного распределения митохондрий. Препараты митохондрий, выделенные из печени крысы, были исследованы Эрикссоном с помощью метода противоточного распределения. Митохондрий, входящие в состав каждого из этих препаратов, можно разделить на две основные популяции. Однако элетронно-микроскопическое исследование не позволило обнаружить никаких различий в структуре этих частиц. Рабочая методика выделения митохондрий из печени крыс. • Среда выделения: 0,25 М раствор сахарозы, содержащий 0,001 М ЭДТА, рН 7,4 • Сахароза - 0,25 М раствор • НС1 - 1 н и 0,1 н растворы • КОН - 1 н и 0,1 н растворы Все реактивы готовятся на бидистиллированной воде. Изолированную печень крысы погружают в 30 мл ледяной среды выделения. После 2х - Зх кратного промывания ткань измельчают ножницами на чашке Петри, стоящей на льду. Кашицу вновь помещают в стаканчик со свежей средой выделения и тщательно промывают. После оседания кусочков ткани на дно, жидкость осторожно сливают и промывание повторяют еще дважды. Ткань переносят в гомогенизатор, добавляют 40 мл среды выделения и измельчают в течение 30 - 40 секунд. К гомогенату добавляют 40 мл среды выделения, перемешивают медленно вращающимся пестиком и разливают его в 2 центрифужных стакана. Центрифугируют в течение 10 минут при 0-2 ОС, при 600 д для удаления обломков клеток и ядерной фракции. Супернатант осторожно сливают и хранят на льду, остатки объединяют и вновь гомогенизируют 20 секунд в 20 мл среды выделения. Гомогенат центрифугируют при 600 д 10 минут, супернатант объединяют с полученным ранее. Для осаждения митохондрии, объединенный супернатант центрифугируют в двух стаканах при 14000 g в течение 10 минут. Остатки объединяют в одном стакане и тщательно суспендируют с помощью пипетки на 1 мл в небольшом объеме среды выделения (около 0,5 мл). .Маленькими порциями, при осторожном встряхивании добавляют 10 мл среды выделения и осаждают митохондрии (14000 g, 10 минут). Осадок суспендируют в 0,25 М сахарозе, не содержащей ЭДТА, и вновь центрифугируют (14000 g, 10 минут). Супернатант сливают, на полученный осадок митохондрии осторожно наслаивают 0,2 - 0,3 мл 0,25 М сахарозы. Легким встряхиванием смывают верхний рыхлый слой осадка. Процедуру повторяют еще дважды и полученный плотный осадок митохондрии тщательно суспендируют с помощью пипетки в 0,4 - 0,5 мл 0,25 М сахарозы. Густую суспензию митохондрии переносят в пробирку и хранят на льду. Заключение В данной работе предложены различные методики выделения митохондрии из печени крыс, но использоваться будет метод с применением ультрацентрифугирования, как наиболее приемлемый и удовлетворяющий критериям простоты работы и необходимой степени чистоты продукта. В дальнейшем планируется фотометрическое изучение влияния этидиум бромида на активность цитохрома с из митохондрии печени крыс. Данная работа представляет практический интерес, так как цитохром с является индуктором апоптоза - программированной гибели клеток. Механизмы этого процесса в настоящее время представляют большой интерес (для лечения онкологических заболеваний). Список литературы 1. Альбертсон Пер-Оке "Разделение клеточных частиц и макромолекул", Москва, 1974 2. Боуэн Т. "Введение в ультрацентрифугирование", Москва, 1973 3. Под ред. Гилярова М.С. "Биология. Большой энциклопедический словарь", Москва, 1998 4. Ленинджер А. "Митохонрия" Москва "Мир", 1966 5. Решетников В.Н. и др. "Техника биохимического исследования субклеточных структур и биополимеров" т.2, Минск, 1977 6. Эванз У. Г. "Биологические мембраны. Методы", Москва, 1990 Реферат на тему: Биологическая характеристика возбудителей вирусных трансфузионных гепатитов Министерство образования и науки Украины Одесский Национальный Университет им. И. И. Мечникова Биологический факультет Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии “Биологическая характеристика возбудителей вирусных трансфузионных гепатитов” Курсовая работа студента IV курса заочного отделения Богуша Андрея Николаевича Научный руководитель Доцент Панченко Николай Никитович ОДЕССА – 2003 Содержание Введение………………………………………………………………………...3 1. Обзор литературы…………………………………...…………....…………5 1. Историческая справка………………...………………………….…….— 2. Вирус гепатита В………………………………………………………..6 1. Формы HBV, встречающиеся в крови……..…………………………-- 2. Структура HBsAg………………………………………………………7 3. Структура вирусных нуклеокапсидов ………………………………..8 1. Природа HBeAg ……...……………………………………………9 2. Роль HBxAg……………………………………………………….10 4. Физическая и генетическая структура вирусной РНК………………-- 5. Механизм репликации вирусов……………………………………...11 6. Чувствительность HBV к физико – химическим факторам………..12 3. Вирус гепатита D……………………………...……………………...13 1. Пути передачи HDV…………………………………………………..— 4. Вирус гепатита С……………………………………………………...15 1. Генетическая неоднородность HCV. ……………………………….— 2. Эпидемиология HCV…………………………………………………16 3. Чувствительность HCV к внешним факторам……………………...18 5. Вирус гепатита G……………………………………………………...19 1. Эпидемиология HGV………………………..………………………..20 6. Вирус гепатита TTV…………………...……………………………...21 1. Систематизация гепатита TTV………………………………….…...22 2. Алиментарное заражение TTV…………………..…………………..— 3. Взаимосвязь гепатита TTV с географическим регионом……….....— 4. Эпидемиология TTV………………………………………………….23 5. Роль гепатита TTV в развитии гепатотропной инфекции…...……..24 Заключение…………………………………………………………………..25 Список литературы………………………………………………………….26 Введение Вирусные гепатиты составляют большую группу инфекционных заболеваний человека, характеризующихся симптомами общей интоксикации и преимущественным поражением печени. Заболевания имеют сходную клиническую картину, но различаются этиологией, эпидемиологией, патогенезом и исходами. К возбудителям вирусных гепатитов относят вирусы различных таксономических групп; всех их отличает способность преимущественно вызывать специфические поражения клеток печени. В настоящее время выделяют восемь типов возбудителей вирусного гепатита, которые с учетом эпидемиологических особенностей можно условно отнести к двум категориям. Вирусные гепатиты с парентеральными (кровяно - контактым) механизмом передачи (гепатиты B, C, D, G и ТТV) и гепатиты с энтеральным (фекально - оральным) механизмом передачи (гепатиты А, Е и предположительно, F), передаются пищевым, водным и контактным путями. Но мнению экспертов ВОЗ наибольшую опасность представляют гепатиты с парентеральным механизмом передачи, которые чаще вызывают хронические процессы в печени. Среди разнообразных этиологических факторов хронического гепатита ведущее значение имеют вирусы В, С и D. Исследованиями, проведенными в 1994 году Ивашкиным В. Т., установлено, что 64 % больных хронические заболевания печени и 60,8 % циррозов явились прямым следствием предшествующего инфицирования вирусами гепатитов В и С. Хронический процесс может развиться после любого известного клинического варианта острых вирусных гепатитов, однако ведущее значение в формировании хронической инфекции принадлежит безжелтушным, бессимптомным, инапаратным формам и носительству вирусов В и С. Предрасполагают к формированию хронического гепатита алкоголизм, злоупотребление некоторыми лекарствами, неполноценное питание [7,10]. В настоящее время, как никогда раньше стоит проблема посттрансфузионных гепатитов и Службы крови. Существенное снижение качества жизни в Украине, ослабление государственной поддержки донорства и работы с населением привели к сокращению числа доноров и к устойчивой тенденции в сторону увеличения платных добровольцев, а также к общему увеличению возраста доноров и к практике найма доноров, выдаваемых за родственников. Следствием данной ситуации является то, что сегодня ни один человек во время серьезного хирургического вмешательства не застрахован от заражения гепатитом. Выходом из подобной проблемы может служить: разработка новых, более эффективных и доступных методов серодиагностики, усовершенствование прежних и создание новых генетически модифицированных вакцинных препаратов и, конечно же, абсолютно противоположный подход к донорству. Учитывая всю изложенную выше информацию, данную тему считаю актуальной и заслуживающей дальнейшего развития. Целью настоящей работы было ознакомление с данными отечественных и зарубежных авторов о биологических свойствах, механизмах патогенеза вирусов – возбудителей парентеральных гепатитов. 1. Обзор литературы 1. Историческая справка С. П. Боткин в 1888 г. впервые высказал предположение об инфекционной природе «катаральной желтухи» человека. Вирусная природа болезни была доказана в 1937 г. в США Дж. Финделем и Ф. Мак Коллюмом. Это открытие подтвердили П. Г. Сергеев и Е. Тареев, в 1940 г. при изучении желтух у привитых против лихорадки Паппатачи. В 1965 г. В. Блюмберг выделил так называемый «австралийский антиген», оказавшийся поверхностным антигеном вируса гепатита В (HBsAq), а в 1970 г. – Д. Дейн выявил вирус гепатита В в крови и клетках печени. В 1973 г. С Фейнстоуну в фекалиях больного удалось идентифицировать возбудитель гепатита А. В 1977 г. М. Ризетто открыл вирус – паразит D (дельта – вирус), вызывающий дельта инфекцию только при наличии у больного HBsAq. В конце 80-х годов группе американских специалистов удалось выделить и идентифицировать геном вируса С и в 1989 г. разработать тест-систему ИФА. На вирус гепатита Е первым в 1980 г. обратил внимание М. Гуро, а в 1982 г. С. С. Балаян, обладавший напряженным иммунитетом к ВГА заразил себя материалом, полученным от девяти больных повторно заболевших вирусным гепатитом (первый гепатит у них был связан с ВГА), и заболел. Так, экспериментально было доказано существование этиологически самостоятельного возбудителя, который окончательно был идентифицирован в 1987 г. Вирус гепатита G был выделен в 1995 г. научной группой фирмы “Abbot” от больного хроническим гепатитом С. Последним вирусом, получившим научную классификацию на сегодняшний день, является возбудитель гепатита ТТ, который в 1997 г. обнаружили японские исследователи [10]. Вирус гепатита F сейчас является предметом дискуссий и споров между учеными. 2. Вирус гепатита В. HBV распространен по всему миру. Является самым распространенным началом хронических заболеваний печени, в том числе гепатоцеллюмерной карциномы у человека[ 4 ]. Открытию HBV предшествовало выявление в 1965 году в крови австралийского аборигена так называемого австралийского антигена, представляющего собой поверхностные капсидные белки вируса гепатита В человека. Позднейшими исследованиями были установлены аналогичные вирусы и у животных (сурков, земляных и лесных белок, кенгуру, цапель, пекинских уток, гремучих змей). HBV в последние годы отнесен к семейству – Hepadnaviridae [ 6 ]. 1.2.1 Формы HBV, встречающиеся в крови. Поверхностный антиген HBV (HBsAg) был открыт в 1963 году при исследовании полиморфизма сывороточных белков человека [ 10,15 ]. Первыми корпускулярными формами HBsAg, которые установила электронная микроскопия были небольшие сферические частицы, диаметром от 16 до 25 нм, названные в дальнейшем (22 нм) частицами, а также нитевидные и палочкообразные частицы, имеющие 22 нм в ширину и несколько сотен нанометров в длину. Они состоят из белка, углеводов и липидов, не содержат ДНК и сейчас рассматриваются как неполная форма оболочечного белка вируса [1 ]. В 1970 году Дейн описал большую более сложную частицу, содержащую HBsAg. Она представляет собой полный вирион HBV, диаметром 42 нм, имеет липидосодержащий наружный слой (оболочку) толщиной 7 нм и электроноплотную сферическую внутреннюю сердцевину (нуклеокапсид) диаметром 28 нм. Поверхность вириона имеет антигенные детерминанты HBsAg, общие с неполными формами вируса. Наружная оболочка удаляется обработкой неионными детергенами, такими как NP-40, после чего остаются сердцевинные частицы, содержащие HBсAg, химически отличающиеся от HBsAg. Сердцевина вируса содержит также вирусную ДНК с ковалентно присоединенным полипептидом, протеинкиназу и третий антиген, ассоциированный с инфекционностью HBV – (HBeAg), присутствующий в скрытой форме [5,15]. Введение шимпанзе 1 мл некоторых неразведенных HBsAg реактивных сывороток, полученных от больных с хроническими HBV, после антивирусной терапии, не вызвало у них инфекции. Вывод: у таких больных HBsAg циркулирует только в составе неполных частиц, но не в составе полных вирионов. Однако, сыворотки некоторых больных были заразны в разведениях 10- 7 [ 2,12 ]. 1.2.2 Структура HBsAg. Это сложный антигенный комплекс. В этих частицах может определятся пять антигенных детерминант. Группоспецифическая детерминанта а – общая для всех препаратов HBsAg. Еще есть две пары подтиповых детерминант: d или y, или w, или r – взаимоисключающие друг друга. Описаны антигенная гетерогенность w – детерминант и добавочные детерминанты, такие как q или x или g [15,7]. Идентифицировано 8 подтипов HBsAg: ayw1, ayw2, ayw3, ayw4, ayr, adw2, adw4, adr [11]. Необычные комбинации подтипов детерминант выделяются на Дальнем Востоке. Наблюдается неравномерное географическое распределение подтипов HBsAg среди зараженного населения. В Северной Америке, Европе и Африке преобладают подтипы adw и ayw, а в Юго – Восточной Азии и на Дальнем Востоке – подтип adr на ряду с adw и ayw. Подтип ayr менее распространен в мире, но он идентифицирован у нескольких изолированных групп населения Океании [15,3]. Доказано, что вирус – специфическим антигеном является HBsAg, иммунизация которым обеспечивает защиту от HBV. Для определения х/с HBsAg сферические нитевидные частицы можно очистить гельфильтарцией, скоростным зональным центрифугированием в градиенте плотности CsCl. При центрифугировании в градиенте плотности CsCl эти частицы отделяются от вируса благодаря различиям в их плавучих плотностях. Плавучая плотность (22 нм) – сферических частиц подтипов adw и ayw равна 1,20 г/см3 в CsCl и 1,17 г/см3 в сахарозе. Это свидетельствует о значительном содержании в них липидов приблизительно 30%. Более высокая плавучая плотность полных вирионов приблизительно 1,28 г/см3 для вирионов с нуклеокапсидом, содержащем ДНК и 1,24 г/см3 для вирионов с пустой сердцевиной, отражает вклад нуклеиновой кислоты в нуклеокапсиды. Липидный анализ дает смесь липидов[5,7,3,15]. Средняя молекулярная масса HBsAg / adw равна 3,7106 - 4,6106. при изоэлектрическом фокусировании препаратов (22 нм) – частиц HBsAg выявляется несколько популяций с различными значениями pI от 3,65 до 5,3. Средний коэффициент сидиментации для HBsAg варьирует от 39 S до 54 S. Определение среднего удельного коэффициента экстинкции 1% р-ра очищенного белка HBsAg при 280 нм лежит в пределах от 37,3 до 60,0 [13]. Методом электорофореза в ДСН – ПААГ в очищенных препаратах (22 нм) – частиц HBsAg adw - , ayw – и adr – подтипов выделено 7 или более полипептидов с молекулярной массой от 25000 до 100000. В связи с тем, что наружная оболочка вирионов HBV содержит HBsAg и липиды (частично взятые у клетки хозяина), предположили, что она химически похожа на 22 нм частицу HBsAg [5,7,15]. 1.2.3 Структура вирусных нуклеокапсидов. Сердцевина вириона несет сердцевинный антиген HBV (HBcAg), который обнаружен в крови, как внутренний компонент вириона. Он иногда определяется в сыворотке в ранний период виремии до появления антител к HBсAg. Исследования показали, что значительная фракция HBсAg – частиц, выделенных из вирионов и меньшая фракция их выделенная из зараженной печени, имеет высокую плавучую плотность в CsCl (1,38 г/см3) и содержит ДНК и ДНК - полимеразную активность [1,13,15]. Установлено, что высокоочищенные сердцевины, полученные из вирионов и HBсAg – частицы, выделенные из печени, содержат несколько уникальных полипептидов от 19 к до 38 к. Полипептид 19 к может реагировать с антителами е – антигену HBV (анти - HBe) [14,15]. 1.2.3.1 Природа HBeAg Идентифицирован в 1972 году; физически и антигенно отличается от HBsAg и HBсAg, трудно поддается очистке, представляет собой комплекс антигенов. В огаровом геле дается до 3 линий преципитации: е1, е2, е3. в сыворотках больных HBV определяются как связывающийся с (IgG) HBсAg с молекулярной массой 300 к, так и меньший «свободный» HBeAg с молекулярной массой 30 – 35 к. Свободная форма способна к диссоциации на меньшие полипептиды с молекулярной массой 15,5 к. Особо следует отметить, выраженную корреляцию присутствия HBeAg в сыворотке больных с высокой концентрацией физических вирусных частиц. Есть данные, что HBeAg и вирионы продуцируются вместе во время инфекции, кроме этого известно, что HBeAg является компонентом вириона, из которой активно высвобождается при разрушении ее детергентом [5,15]. Информация об HBeAg заложена в С – гене. Многочисленные факты, полученные при изучении HBV позволили сделать вывод о связи HBeAg с инфекционностью и наличием вируса. Оказалось, что инфекционность сывороток крови с HBeAg в миллион раз выше, чем с анти – Hbe. Однако, эта связь не абсолютна. Выявлены мутантные формы HBV, при которых блокируется синтез HBeAg. При этом, не смотря на наличие анти – Hbe в сыворотке крови удается тестировать ДНК – HBV. Исследования последних лет, связанные с изучением мутантных форм HBV, позволили по-новому взглянуть на значение HBeAg в патогенезе HBV. Предполагают, что у матерей носителей HBV HBeAg, проходя через плаценту, вызывает развитие иммунной толерантности, приводящей к прогрессированию в хронический гепатит [7,15]. 1.2.3.2 Роль HBxAg Считают, что х – антиген является как регуляторным белком, усиливающим синтез вирусных белков, так и возможно, белком, включенным в структуру HBV. HBxAg играет особую роль в развитии первичной гепатоклеточной карциномы. Р – ген, ДНК – полимеразы - фермент, информация о котором заложена в ДНК HBV. Он обладает ферментативной активностью как РНК – зависимая ДНК – полимераза и необходим для достройки внутренней короткой цепи ДНК HBV в процессе ее репликации [13,15]. 1.2.4 Физическая и генетическая структура вирусной ДНК. Вирионы HBV имеют маленькую кольцевую, частично двухцепочечную молекулу ДНК. Одноцепочечные участки варьируют по длине, составляя в различных молекулах от ( 15 до 60%. Таким образом, ДНК состоит из длинной цепи L постоянной длины (( 3220 оснований) во всех молекулах и короткой (S), которая в различных молекулах варьирует по длине от 1700 до 2800 оснований. ДНК полимеразы достраивает одноцепочечные участки вирусной ДНК до полностью двухцепочечной молекулы, содержащей приблизительно 3200 bр. Синтез ДНК начинается на 3' конце короткой цепи, которая в разных молекулах находится на различных участках в пределах специфической области ДНК и заканчивается по достижении 5' конца короткой цепи, расположенного в строго определенной месте. Длинная цепь не является замкнутой окружностью: в точке, расположенной приблизительно на расстоянии 300 bp от 5' конца короткой цепи, существует разрыв. С помощью нагревания при определенных условиях, которая вызывает избирательную денатурацию 300 – нуклеотидной области между 5' концом короткой цепи и разрывом длинной цепи, кольцевая ДНК может быть превращена в линейную форму с одноцепочечными липкими концами. Линейная форма может быть вновь переведена в кольцевую путем реассоциации комплементарных одноцепочечных концов. По видимому, 5' концы обеих, как длиной, так и короткой цепей ДНК HBV блокированы таким образом, что предотвращено их фосфорилирование полинуклеотиназой. Химическая природа цепи ДНК, выделенной из вирионов ковалентно присоединена к полипептиду, что предотвращает ее фосфорилирование [7,15]. 1.2.5 Механизм репликации вирусов. После проникновения вируса в клетки печени в клеточных ядрах формируются замкнутые кольцевые вирусные ДНК, состоящие из 3200 bp. Они могут функционировать как матрицы для синтеза вирусной мРНК и синтеза плюс РНК полной длины, новосинтезированная вирусная ДНК – полимераза и белок – затравка для синтеза минус – цепи ДНК собираются в комплекс с мажорным структурным полипептидом в сердцевины вируса и образуют сердцевину или нуклеокапсид вируса. Затем внутри нуклеокапсида синтезируется минус – цепь вирусной ДНК. В этом процессе используется белковая затравка и РНК матрица, которая по мере синтеза ДНК деградирует под действием РНК азы Н. на матрице минус – цепи ДНК кольцевой конформации синтезируется плюс – цепь вирусной ДНК. Затем частицы сердцевины собираются в полные вирионы с HBcAg и липидосодержащими оболочками клеточной мембраны. В случае HBV формирование вируса и выделение его из клетки могут, происходить, очевидно, на любой ступени после сборки сердцевины, так как вирионы (частицы Дейна) содержащие молекулы гибридов ДНК – РНК, а также частично одноцепочечные кольцевые ДНК обнаруживаются в крови. Эндогенное ДНК полимеразы в вирионах катализируют включение нуклеотидов в минус – цепи ДНК гибридов РНК – ДНК и в плюс - цепи ДНК частично одноцепочечных молекул [15]. 1.2.6 Чувствительность HBV к физико – химическим факторам. Характеризуется значительной устойчивостью, при t = -20Со сохраняется до 20 лет, не инактивируется при замораживании – оттаивании, сохраняется при 56 Со около суток, а при 60 Со – 30 минут. Антиген устойчив к воздействию протеолитических ферментов и органических растворителей. Под действием эфира, хлороформа, 1,5% формалина, 2% р-ра фенола не инактивируется несколько часов. При t = 100 Со надо несколько минут, чтобы убить вирус. В сыворотке сохраняется 6 месяцев при 30 – 32 Со. после высушивания вирус сохраняет жизнеспособность при 25 Со около недели. При процедуре фракционирования плазмы по Кону, большая часть HBV, HBeAg, ДНК – полимеразы сохраняется в первой фракции (фибриноген, фактор - восемь) или во фракции три (протромбиновый комплекс), тогда как большая часть HBsAg перемещается во фракцию четыре (плазматических белков), а меньшее количество во фракции три и пять (альбумин). После прогревания HBV до 60Со в течении 4 часов вирус не инактивируется, 10 часов при 60 Со ликвидирует его. При 98 Со инфекционность сыворотки частично устраняется через 1 минуту или полностью через 20 минут. Сухой жар 160 Со разрушает инфекционность через час. В другой серии опытов HBV в течении 10 минут обрабатывали при 20 Со одним из пяти дезинфицирующих препаратов (гепатохлоридом натрия + 500 мг свободного активного хлора на 1 литр; Cidex СХ – 250 + 2% водный р-р глутаральдегида, рН – 8,4; Sporicidin рН – 7,9 + 0,12% - ный глутаральдегид и 0,44% - ный фенол; 70% - ным изопропиловым спиртом; Weskodine, разведенным 1:213 и содержащим 80 мг активного йода на 1 литр) и затем вводили одному шимпанзе. Ни у одного из пяти не было отмечено признаков заболевания. На конец отмечено, что обработка вета – пропилактоном + УФ – лучами уменьшает титр HBV в плазме приблизительно в 10 млн. раз [14,15]. 1.3 Вирус гепатита D Впервые обнаружил Ризетто в 1977 году в гепатоцитах во время вспышки сывороточного гепатита в Южной Европе. Позднее стали выявлять повсеместно. Возбудителем заболевания является дефектный вирус с размерами вириона 35 – 37 нм. Систематизирован в состав Deltavirus семейства Togaviridae. Внутренний компонент частицы состоит из РНК с относительной молекулярной массой 500.000. прослеживается четкая связь между HBV и DAg. DAg является саттелитом HBV; HBsAg которого всегда является внешней оболочкой вируса гепатита D. Таким образом, полноценный вирус D состоит из РНК, внутреннего антигена (YDAg) – собственно вируса гепатита В и его внешней оболочки, состоящей из HBsAg. Геном гепатита D кодирует лишь один известный продукт – фосфопротеин, обладающий антигенными свойствами [2]. Вирус гепатита D термоустойчив, УФ – облучение инфекционную активность не уменьшает. Надежно убивается при автоклавировании в режимах, аналогичных для HBV. Погибает при кипячении не раньше, чем через 5 минут [14]. 1.3.1 Пути передачи HDV Передается D-инфекция парентерально, с зараженной кровью. Часто она встречается у больных с гемофилией, у лиц, имеющих контакт с кровью. Резервуаром HDV является инфицированный человек. Заражающая доза для D- гепатита существенно меньше, чем у HBV и составляет всего 10-11 мл вируссодержащей крови. Вирус HDV по содержанию в биологических жидкостях уступает HBV, но все они считаются потенциально опасными. Возможно также передача HDV при половых контактах (гетеросексуальные ( 50%, гомосексуальные более 90%). Есть возможность передачи HDV от матери к ребенку, большая при родах, меньшая – при кормлении грудью [10]. Среди животных резервуар пока не обнаружен. Распространение HDV коррелирует с уровнем выявления HBsAg. Среди носителей HBV около 5% (от 0,1% до 20 – 30%), населения инфицировано HDV. Наибольшая зараженность в странах экваториального и тропического климата. Эндемичной зоной HDV является Италия и страны Ближнего Востока. По данным С. О. Вязова этот гепатит широко распространен и в СНГ и чаще выявляется при тяжелых хронических заболеваниях печени [10,14]. 4. Вирус гепатита С Обнаружен у людей, заболевших гепатитом после переливания крови или ее препаратов, где отсутствовали маркеры HBV. Это дало основания утверждать, что существует еще один или несколько возбудителей вирусных гепатитов с парентеральным механизмом передачи [3]. HCV систематизирован в семейство Flaviviridae, род Hepavirus. Вирион представляет собой вирус сферической формы, диаметром 55 – 65 нм. Геном HCV представлен однонитиевой +РНК, протяженностью около 10000 нуклеотидов. HCV вызывает заболевания только у человека, но в экспериментальных условиях инфекционный процесс можно воспроизвести только у высших обезьян. Характеризуется высокой степенью изменчивостью генома (известно 10 – 14 генотипов и более 50 подтипов вируса), по некоторым источникам известно более 90 субтипов и множественных вариантов вируса, обозначаемой как квазиды. Зарегистрирована территориальная неравномерность циркуляции генотипов HCV [6]. Ряд биологических характеристик HCV имеет сходство со свойствами ВИЧ и служит основанием для изучения возможностей патогенетической роли HCV в поражении кроветворной системы. К таким биологическим характеристикам относятся: 1. Высокий уровень спонтанных мутаций; 2. Способность к длительной персистенции в иммунокомпетентных клетках кроветворной системы, что обуславливает длительное выживание и дессименацию HCV в организме хозяина и закономерные иммунные нарушения с появлением значительного количества аутоантигенов [7]. 1. Генетическая неоднородность HCV. Существенной особенностью HCV является его генетическая неоднородность, соответствующая особенно быстрой замещаемости нуклеотидов. В результате образуется большое число разных генотипов и субтипов. Они отличаются друг от друга иной последовательностью нуклеотидов. Наиболее консервативны С – протеин, а в неструктурной области NS5 - протеин и РНК - зависимая РНК полимераза. С другой стороны, белки внешней оболочки Е2 / NS1 и Е1 особенно вариабельны. По началу разграничивали 4 – 6 разных генотипов HCV инфекции.в последующих классификациях разграничивают 11 генотипов и субтипов HCV, согласно последним данным Bukh J. Выделяют уже 30 разных субтипов. Особенно много субтипов HCV регистрируются в Африке и Юго-Восточной Азии. Это косвенно подтверждает существование HCV в этих регионах уже в течение нескольких столетий. Допускают, что в Европе и Северной Америке HCV появился позже, чему соответствует существенно меньшее число разных субтипов. Для клинической практики достаточно разграничивать 5 субтипов HCV: 1а, 1в, 2в, 2а, 3а [10]. Установлены существенные географические различия в распространении разных генотипов. Так , в Японии, на Тайване, частично Китае, регистрируются преимущественно генотипы 1в, 2а, 2в. тип 1в даже называют японским. В США преобладает 1а – американский генотип. В европейских странах преобладает генотип HCV 1а, в Южной Европе заметно возрастает доля генотипа 1в. в России чаще регистрируется генотип 1в, дальше с убывающей частотой 3а, 1а, 2а [6,9]. 2. Эпидемиология HCV. HCV как и HBV и HDV относятся к антропонозным трансмиссивным кровяным вирусным инфекциям. Механизм заражения - парентеральный, пути передачи – множественные – искусственные и естественные. Допускают и иные, еще не установленные пути заражения HCV – инфекции, в том числе и аэрозоля. Однако, такое предположение фактических подтверждений не имеет. Источником инфекции является больные HCV, прежде всего с хроническим течением, и хронические лотентные носители HCV. Это определяет априорную близость эпидемиологической характеристики HCV, HBV и HDV [10,11]. К настоящему времени точно документированы два пути передачи HCV: парентеральный и вертикальный. В случае парентерального заражения, требуется относительно большая доза инфицированной HCV–крови (10-2 – 10-1 мл). по оценкам экспертов более 50% случаев HCV связаны с парентеральным механизмом передачи [12]. Участи больных имело место заражение при парентеральных манипуляциях в медицинских учреждениях, особенно остро эта проблема стоит в частной стоматологической практике. Широкое использование гемотрансфузий до введения контроля за донорами способствовало распространению заболевания при использовании крови и ее препаратов. Хотя современные методы их изготовления «гарантируют» инактивацию вируса гепатита. Очевиден риск передачи HCV через инъекционное оборудование. Введение одноразовых шприцев и игл катеторов безусловный прогресс в борьбе с HCV. В странах, которые продолжают повторно использовать плохо простерилизованные медицинские инструменты, будет продовжаться рапространение HCV. После обеспечения полной безопасности донорской крови большинство случав HCV будет обусловлено несоблюдением санитарно – гигиенических правил наркоманами, вводящими наркотики внутривенно (повторное использование нестирильных шприцев и игл, нестерильная фильтрация вводимых препаратов…). Високий уровень HCV среди наркоманов, которые начали вводить наркотики парентерально совсем недавно, свидетельствует об очень „высокой эффективности” этого пути передачи HCV. Описано несколько случав профессионального заражения гепатитом С у медицинских работников с передачей HCV при случайных уколах использованными иглами, хотя такие случаи наблюдаются весьма редко по сравнению, например, с профессиональным зараженим медработников HBV. Серологическое наблюдение за медперсоналом, с которым произошли несчастные случаи, показали, что сероконверсия при заражении HCV происходит относительно нечасто от 0 до 10%. Не имеется убедительных доказательств эффективности пассивной иммунопрофилактики после несчастного случая, поэтому особое внимание должно уделятся соблюдению универсальных мер предосторожности и использованию индивидуальных защитных средств. Впоєне вероятна передача HCV при аккупунктуре, таттуаже и любом повреждении кожных покровов нестирильными инструментами. Результаты большинства исследований показывают, что имеется низкая вероятность передачи инфекции от женщины, у которой обнаружены антитела к HCV, к новорожденному ребенку. Принято считать, что HCV может развиваться лишь в 10% случаев, если этого ребенка родила HCV – положительная мать. Степень риска резко возрастает при наличии у женщины ВИЧ – инфекции. В какое время происходит инфицирование ребенка – в пренотальном периоде, во время родов или в постнотальном – неизвестно. Исследования показали также наличие HCV в грудном молоке, но убедительных данных о его передаче в данном случае нет. В крови же концентрация HCV составляет приблизительно 100 вирионов на мл [14]. Что касается передачи HCV половым путем, то существует социальная закономерность. Гомосексуалисты – мужчины заражаются, приблизительно 95 – 99%, обычные гетеросексуальные пары – менее 10%. Результаты большинства исследований, проведенных в странах Европы и Северной Америки, среди нормальных пар также показали очень низкую передаваемость HCV. Кроме того, исследование методом „случай - контроль” продемонстрировали лиш незначительную повышенную степень риска инфицирования возбудителем HCV у людей, имеющих множественных половых партнеров [10,12]. 3. Чувствительность HCV к внешним факторам. Известно, что HCV устойчив к нагреванию до 50 Со, но надежно инактивируется растворителями липидов (хлороформом). УФ – облучение также значительно влияет на HCV. Во внешней среде не стоек, однако степень его устойчивости к инактивации значительно выше, чем у ВИЧ [6,7]. 5. Вирус гепатита G HGV был выделен из крови больных гепатитами ни А ни В группой ученых Abbot Laboratories в 1995 году. HGV относится к инфекциям с парентеральным механизмом передачи. Возможен также половой и вертикальный путь к инфицированию. В пользу гепатотропности HGV свидетельствует обнаружение РНК HGV в клетках печени, а также развитие острого и фульминантного гепатита вслед за трансфузиями крови или ее продуктов [10], [7]. Таксономическое положение HGV остается невыясненным. Его условно относят к семейству Flаviviridae. Геном образован несегментированной молекулой +РНК, и имеет протяженность 9103 до 9392 (в различных изолятах вируса) нуклеотидов. Состоит из двух структурных HGV свидетельствует роррррр и четырех неструктурных участков, кодирующих белки с функциями, аналогичными функциями соответствующих белков HCV. Особенностью HGV является присутствие дефектного сердцевинного (core) Белка или полное его отсутствие. На 5’ и 3’ нетранслируемых участков имеются элементы, необходимые для регуляции жизнедеятельности вируса. Установлено, что происходящие вблизи 5' участка вставки и выпадения нуклеотидов сдвигают открытую рамку считывания РНК – вируса, приводя к появлению дефектного (core) белка или же полного его отсутствия. Высказываются предположения об использовании HGV – капсидных белков других, возможно еще не открытых вирусов, выполняющих в данном случае роль структурных полипротеинов [12]. Еще одна особенность HGV заключается в отсутствии в генах, кодирующих наружные гликопротеины, гипервариабельной области. Также, как HCV, ВИЧ и другие РНК – содержащие вирусы. Вирусы HGV обладают двумя уровнями вариабельности геномной РНК. Первый заключается в различиях между вирусными геномами, циркулирующими в одном организме квазиды. Второй основан на различиях между вариантами вирусов, обнаруженными в различных организмах, - генотипы. Различные квазиды HGV обладают различной тканевой специфичностью [11]. При классификации вирионов HGV за расхождения типов применяется уровень расхождения нуклеотидной последовательности. ? 30%, а субтипы разделяют при наличии 15% расхождений. Различия между вариантами HGV полной нуклеотидной последовательности генома составляет 10 – 15% и варьирует в зависимости от участка генома от 5 до 30%. В связи с этим принято разделять только генотипы HGV и обозначать их цифрой. К настоящему времени принято выделять 5 генотипов HGV. Исследования участка РНК HGV ІІ и экспериментальное экспрессирование кодированных им белков определено наличие пяти белков с массой, в пределах 20 70 кD. Эти белки выполняют функции протеазы, хеликазы и РНК - зависимой РНК – полимеразы [10,12,16]. 1. Эпидемиология HGV. Установлена закономерность встречаемости генотипа вируса от территории обнаружения. HGV1 – Западная Африка HGV2 – Северная Америка, Европа, Азия, Северная Африка HGV3 – Юго-Восточная Азия HGV4 – Южная Африка. Источниками распространения HGV являются больные острым, хроническим HGV и носители. Среди лиц, вводящих себе внутривенно наркотики, HGV выявляется в три раза чаще, чем у других наркоманов. При HGV возможен и половой путь заражения. Отмечено увеличение процента выявления HGV в зависимости от количества половых партнеров, от 8 до 21% (у лиц с наличием более 100 партнеров). Гомосексуалисты – мужчины подвержены риску на 95% [19]. Можно считать доказанным существование «вертикального пути передачи» HGV от матери к ребенку. HGV заражено, примерно 1% населения. Инфекция характеризуется длительной персистенцией до 8 лет с переходом 36% в хроническую форму [16,21]. 6. Вирус гепатита ТТV В 1997 году японские ученые во главе с T. Neshirawa с помощью варианта реакции амплификации генов (репрезентативного дифференциального анализа), предназначенная для поиска еще неизвестных вирусов, исследовали сыворотки крови, собранные от пяти пациентов. Был выделен клон размером в 500 оснований ранее неизвестного вируса. Учитывая что он выделен от людей с посттрансфузионным гепатитом его обозначили как TTV (transfusion – transmited virus), то есть, вирус, передаваемый при переливании [9,10]. При дальнейшем исследовании TTV по молекулярному клонированию и характеристике установлено, что он (изолят ТА278) содержит линейную одноцепочечную ДНК, протяженностью 37 - 39 оснований [16]. При поиске гомологий последовательностей ДНК TTV с ДНК других вирусов не обнаружено тех последовательностей, которые были достоверны гомологичны. При анализе выявлены две открытые рамки считывания (ORF), обозначенные как ORF1 и ORF2, которые соответственно кодируют 770 а. к. и 202 а. к. Фракционирование вируса в градиенте плотности сахарозы с продолжительной обработкой, содержащего вирус – материала твином – 80 и без нее выявлено, что в обоих случаях пик плотности TTV соответствовал 1,26 г/см3. Эти данные указывают на отсутствие у вируса липидной оболочки. Важные результаты получены при выявлении ДНК TTV из ткани печени. Вирус обнаружен в биопсийном материале пяти пациентов. ДНК TTV у них выявлено в сыворотке крови. При чем, в печеночной ткани концентрация ДНК TTV оказалась выше. Это говорит о гепатропности TTV. Кроме гепатоцита TTV удалось идентифицировать в мононуклеарах периферической крови у четырех человек из восьми, в сыворотке крови которых имелось ДНК TTV [18]. 1. Систематизация гепатита TTV. Сравнение свойств TTV с известными ДНК – содержащими вирусами дало основание предположить, что он наиболее близок к вирусам, входящим в семейство Circoviridae и в семейство Parvoviridae. Полученные данные не позволили установить к какому из этих семейств относится TTV. Однако, в пользу парвовирусов могут служить следующие установленные факты: парвовирус гусей (GPV) может быть этиологическим агентом смертельного гепатита гусей, а парвовирус человека B19 ранее рассматривался как причина нескольких случаев гепатита [19,20]. 2. Алиментарное заражение TTV Известно, что некоторые парвовирусы млекопитающих, такие, как парвовирус кошек и вирус энтерита норок, имеют фекально – оральный механизм передачи. Эта информация и высокая вероятность того, что TTV – парвовирус, позволила Окамото предположить и экспериментально доказать наличие этого вируса в фекалиях больных гепатитом, ассоциированным с TTV. Он был определен у трех из пяти пациентов, в крови которых была позитивная ПЦР, свидетельствующие о TTV. Причем, в одном случае титр TTV в фекалиях был выше, чем в сыворотке крови: 105 и 104. плавучая плотность в градиенте CsCl вирусов, выделенных из фекалий и сыворотки крови, оказалась близка (1,35 и 1,32 г/см3) [10,16]. 3. Взаимосвязь гепатита TTV с географическим регионом. Полученные результаты позволили обосновать гипотезу о том, что TTV может передаваться как парентерально, та и фекально – орально. Анализируя нуклеотидные последовательности различных изолятов вируса выделили две группы вирусов (генотипы), ДНК которых отличается друг от друга последовательностями более чем на 30%. Они получили обозначение G1, G2. Внутри каждого генотипа (при отличиях 11 – 15%) выделили субтипы G1a, G1b и G2a, G2b. При дальнейшем анализе новых изолятов вируса выявлен третий генотип вируса G3, а также ранее неизвестный субтип 1С. При филогенетическом анализе ДНК TTV 190 изолятов вируса, обнаруженных в Азии, Африке и Южной Америке, установлено наличие дополнительных субтипов – 2с, 2d, 2e, 2f. В сыворотке крови больных гепатитом неизвестной этиологии зарегистрирован четвертый генотип TTV. Обобщая исследования по генотипированию можно сделать следующие выводы: наиболее широко представлены субтипы 1а и 1в; отсутствует взаимосвязь того или иного


	Новинки рефератов :: Реферат: Культура публичной речи (Психология) Реферат: Принципы организации дискуссионных клубов "Дебаты" в средней школе (на примере гимназии № 63 Санкт-Петербурга) (Педагогика) Реферат: Вопросы на экзамен по ДМ (детали машин) (Технология) Реферат: Гипоталамус (Биология) Реферат: Алиментные обязательства в брачных и семейных правоотношениях (Право) Реферат: Семейство Злаки (Биология) Реферат: Авторское право (Право) Реферат: Историко-психологический портрет А.П. Извольского (Исторические личности) Реферат: Заключение, изменение и расторжение договоров (Гражданское право и процесс) Реферат: Богатство мыслей и чувств лирики А.С. Пушкина (Литература : русская) Реферат: Татарстан - республика химии (Химия) Реферат: Сюрреалистическое искусство Сальвадора Дали (Искусство и культура) Реферат: Комедии Аристофана. Место комедии в античном обществе (Литература) Реферат: Судебные органы власти Украины (Государство и право) Реферат: Расчёт баланса (Аудит) Реферат: Особенности восприятия пейзажной лирики при помощи музыки и живописи в 3 классе (Педагогика) Реферат: Римский Клуб и его историческое развитие (Политология) Реферат: Профориентация учащихся (Педагогика) Реферат: Первое русское кругосветное плавание под командованием Ивана Федоровича Крузенштерна (1803-1806 гг.) (История) Реферат: Начальный этап работы над музыкальным произведением (Музыка)


	Copyright © GeoRUS, Геологические сайты